Irányelvek a cellák felolvasztásához
- A fagyasztott sejteket gyorsan (< 1 perc) olvasztja fel 37°C-os vízfürdőben.
- A felolvasztott sejteket lassan hígítsa fel, mielőtt inkubálja őket, előmelegített táptalaj segítségével.
- A felolvasztott cellákat nagy sűrűséggel lemezezze le a visszanyerés optimalizálása érdekében.
- Mindig megfelelő aszeptikus technikát alkalmazzon, és lamináris áramlású elszívóban dolgozzon.
Miért történik a sejtek felolvasztása?
Létfontosságú a sejtek megfelelő felolvasztása a tenyészet életképességének megőrzése és a tenyészet gyorsabb helyreállítása érdekében. Egyes krioprotektánsok, például a DMSO, 4 °C felett mérgezőek. Ezért elengedhetetlen, hogy a tenyészeteket gyorsan felolvasztsák és tápközegben hígítsák a toxikus hatások minimalizálása érdekében.
Mi a kiolvasztás folyamata?
A felolvasztás az a folyamat, amelynek során a fagyasztott terméket a fagyasztott állapotból olyan hőmérsékletre (általában 0°C feletti) állítjuk fel, ahol nincs maradék jég, azaz „leolvasztás”. A felolvasztást gyakran egyszerűen a fagyasztási folyamat megfordításának tekintik.
Mi a legjobb módja a sejtek lefagyasztásának?
Fagyassza le lassan a sejteket a hőmérséklet körülbelül percenkénti 1°C-os csökkentésével szabályozott sebességű krio-fagyasztóval vagy krio-fagyasztó edénnyel, például „Mr. Frosty”, beszerezhető a Thermo Scientific Nalgene laborware-től (Nalge Nunc). Mindig az ajánlott fagyasztóközeget használja.
Hogyan lehet kiolvasztani az elsődleges cellát?
Törölje le a sejteket tartalmazó injekciós üveg külsejét 70%-os etanollal vagy izopropanollal. Biológiai biztonsági szekrényben csavarja el a kupakot negyed fordulattal a belső nyomás csökkentése érdekében, majd húzza meg újra. Gyorsan olvasztja fel a sejteket 37°C-os vízfürdőben az injekciós üveg finom forgatásával. Távolítsa el az injekciós üveget, ha kis mennyiségű jég marad.
