A pigmentek kivonására a kloroplasztiszokat izoláló pufferben szuszpendáljuk. Ahhoz, hogy ki tudjuk vonni a pigmenteket a kloroplasztiszokból, először meg kell szabadulnunk a puffertől. Mi a legjobb módja a kloroplasztok elválasztásának a puffertől? Használjon centrifugát a szétválasztáshoz
Hogyan lehet izolálni egy kloroplasztot?
A kloroplasztizolációs módszerben a sejtfalat mechanikusan törik meg keverővel vagy homogenizátorral. Ezután a töretlen levélszövetet és a sejttörmeléket szűréssel eltávolítjuk. A kloroplasztokat percoll gradiens alkalmazásával centrifugálással gyűjtjük össze.
Hogyan készíthetsz kloroplasztisz-szigetelő puffert?
Készítse elő a szükséges mennyiségű 1X kloroplasztizolációs puffert a 2X puffer készlet 1:1 arányú dH2O vízzel történő hígításával Adjon hozzá 10 µL 10%-os BSA oldatot minden ml 1X Chloroplasthoz. Izolációs puffer. Közvetlenül a felhasználás előtt adjon hozzá 1 µL DTT-t 1 ml Chloroplast izolációs pufferhez. Jelölje be ezt a puffert "Complete Buffer"-ként.
Mi van a kloroplasztizolációs pufferben?
DNS-izoláló puffer: 100 mM NaCl, 100 mM Tris-HCl (pH 8,0), 50 mM EDTA és 1 mM DTT A kloroplasztisz-lízist a kloroplaszt pellet 8 ml DNS-izoláló pufferrel, 1,5 ml 20%-os SDS-sel, 20 µl 2-merkaptoetanollal és 30 µl proteináz K-vel (10 mg/ml) egy centrifugacsőbe 55 °C-on 4 órán át.
Mi a pH-értéke a spenótlevél homogenizálásához használt puffernek a kloroplasztisz-izolálási protokollban?
A spenót jó kloroplasztiszokkal van feltöltve, és könnyen izolálódik. A leveleket hideg turmixgépbe kell tennie 0,1 M foszfát pufferrel, pH 7,5 és 0,5 M szacharózzal, nehogy szétrepedjenek.
