Bimolecular Fluorescence Complementation (BiFC) vizsgálat egy olyan módszer, amelyet a fehérje-fehérje kölcsönhatás közvetlen megjelenítésére használnak in vivoélő sejtes képalkotással vagy fixált sejtekkel. … A BiFC-t először Hu és munkatársai írták le.
Hogyan működik a bimolekuláris fluoreszcencia komplementáció?
A BiFC működési elve egy fluoreszcens komplex kialakításán alapul, egy fluoreszcens fehérje két szegmensének összekapcsolódása eredményeként, amikor azok egymás közelében vannak a fragmentumokban lévő fehérje-fehérje kölcsönhatás miatt, pl., a BiFC-ben a fluorofor amino- és karboxil-terminálisra van osztva.
Mi az a BiFC-teszt?
bimolekuláris fluoreszcens komplementációs (BiFC) vizsgálat lehetővé teszi a fehérjekölcsönhatások egyszerű és közvetlen megjelenítését élő sejtekben (45). A BiFC megközelítés egy fluoreszcens komplex képződésén alapul, amikor két fehérje egy fluoreszcens fehérje nem fluoreszcens fragmenseivel fuzionálva lép kölcsönhatásba egymással (ábra).
Miért végezték el a BiFC tesztet?
A BiFC ötlete az, hogy a GFP felét fejezze ki az Ön érdeklődésre számot tartó fehérjéivel. Ha a POI-k kölcsönhatásba lépnek, összehozhatja a két felét, hogy működőképes GFP-t kapjon. Tehát ha a GFP fele expresszálódik a sejtben, nem vagyok meglepve, hogy egy GFP antitest képes kimutatni.
A BiFC megfordítható?
A BiFC komplexek irreverzibilitását jól dokumentálták (10), és úgy tűnik, hogy a legtöbb, ha nem az összes fluoreszcens protein alapú BiFC rendszer irreverzibilis (8, 33, 43, 48–51).
