A következőkben áttekintést adunk a közvetett immunfluoreszcens festési protokoll különböző lépéseiről
- Kísérlettervezés és minta-előkészítés. …
- Minta rögzítés. …
- Sejtpermeabilizáció. …
- Blokkolás. …
- Primer antitest inkubáció. …
- Másodlagos antitest inkubáció. …
- Ellenfestés és szerelés.
Hogyan végeznek immunfluoreszcenciát?
Minden inkubációs lépés szobahőmérsékleten megy végbe
- Mossa meg kétszer a cellákat, és csipesszel óvatosan helyezze be a fedőlemezt felfelé fordított cellákkal a párásított kamrába.
- Rögzítse 4%-os formaldehiddel 10 percig, majd mossa le 3 ×.
- Permeabilizálja 0,1%-os TX-100/PBS-sel 15–20 percig, majd mossa le 3 ×.
Hogyan alkalmazzuk az immunfluoreszcenciát egy sejtben?
Immunfluoreszcencia protokoll a tapadó sejtekhez
- Beoltás 1–1,5 x104 sejt egy 4-kamrás tárgylemez üregében 500 ml táptalajban. Inkubáljuk 37°C-on 5% CO2.
- 32–36 órával a sejtoltás után távolítsa el a sejttenyésztő táptalajt, és öblítse le a sejteket háromszor 500 µL 1X PBS-sel.
Mi egy példa az immunfluoreszcenciára?
Például egy kutató létrehozhat primer antitesteket egy kecskében, amelyek több antigént is felismernek, majd festékkel kapcsolt nyúl másodlagos antitesteket alkalmazhatnak, amelyek felismerik a kecske antitest konstans régióját (" nyúl anti-kecske" antitestek).
Mire jó az immunfluoreszcens festés?
Az immunfluoreszcens (IF) festés egy széles körben használt technika a biológiai kutatásban és a klinikai diagnosztikában Az IF fluoreszcensen jelölt antitesteket használ specifikus célantigének kimutatására. Ezt követi a képalkotás, ez egy nagyon közvetlen technika, mivel valóban láthat valamit.