Vortexelés nem nyírja el az RNS-ét, így használhatatlanná válik, ha véletlenszerű indító RT-t végez – csak akkor, ha hosszú mRNS-t szeretne klónozni. Az Invitrogen műszaki támogatása is helyes. A kloroform nehezebb, mint a Trizol, és lesüllyed a cső aljára.
Biztonságos az RNS örvénylése?
Ne vortexelje a Trizol-lizátumokat vagy RNS-mintákat, hogy elkerülje a nyírást. Az extrakció után az RNS-mintákat mindig tartsa jégen. Ez a protokoll 1,5 vagy 2 ml-es csőben lizált 1 ml Trizol mintákhoz készült.
Melegítheti az RNS-t?
Ezért kerülje a magas hőmérsékletet ( +65°C felett), mivel ezek befolyásolják az RNS integritását. Ehelyett a másodlagos szerkezetek kiolvasztásához melegítse az RNS-t +65 °C-ra 15 percig denaturáló pufferek jelenlétében.
Hogyan szuszpendálja újra az RNS-pelleteket?
reszuszpendálja újra a pelletet meleg vízzel (40-50 Celsius fokos). inkubálja 45 fokon 10 percig. tedd őket +4-be 4-6 órára.
Hogyan lehet kicsapni az RNS-t?
A.
A sókoncentráció beállítása után az RNS kicsapható 2,5 térfogat etanol vagy 1 térfogatrész izopropanol hozzáadásával és alapos összekeverésével, ezt követi legalább 15 perces hűtés -20°C-on.
