Ha a fehérje nem akkora, mint az antiteste, eluálhat 0,1 M glicinnel, pH 2-3, majd elválaszthatja a kívánt fehérjét az antitesttől a SEC segítségével. (mint a szuperdex 200).
Mi az, hogy eluálódik a fehérje?
A fehérjéket egy növekvő mennyiségű szerves oldószer, például acetonitril gradiensével eluáljuk. A fehérjék hidrofóbitásuk szerint eluálódnak. HPLC-vel végzett tisztítás után a fehérje olyan oldatban van, amely csak illékony vegyületeket tartalmaz, és könnyen liofilizálható.
Miért alacsony a fehérjék pH-értéke?
Az alacsony pH-jú puffer használata a fehérje A-ból való elúcióhoz köztudottan hozzájárul a termék aggregációjához A bizonyítékok korlátozottabb sorozata azonban azt sugallja, hogy az alacsony pH nem az egyetlen A fehérje A kromatográfiában előforduló aggregáció oka, hanem a folyamat egyéb aspektusai is jelentősen hozzájárulhatnak.
Hogyan történik az elúció?
Az analitikai és szerves kémiában az elúció az a folyamat, amikor kivonják az egyik anyagot a másikból oldószeres mosással; mint a betöltött ioncserélő gyanták mosásakor a befogott ionok eltávolítására. … Miután az oldószermolekulák kiszorították az analitot, az analit kivehető az oszlopból analízis céljából.
Hány antitestre van szüksége a Coip-hez?
A rutin Co-IP kísérletekhez az általam használt antitest legfeljebb 2 ug (az én készletemben 1,4-2,0 ug antitest elegendő 2500-5000 ug antitest rögzítéséhez fehérje lizátum.) De ez továbbra is a mintáiban lévő célfehérjék expressziós szintjétől függ, ezért valószínűleg módosítania kell.
